Успешное восстановление фертильности после оптимизированной перфузии и криоконсервации целого яичника с последующей аллотрансплантацией на модели преждевременной недостаточности яичников у крыс

Введение: Сохранение фертильности путем криоконсервации и трансплантации целого яичника с сосудистым анастомозом требует успешной криоконсервации. В настоящем исследовании изучали возможность восстановления функции яичников и естественной фертильности после криоконсервации и трансплантации целого яичника (WOCP&TP) на модели преждевременной недостаточности яичников (ПНЯ) у крыс. Также оценивали влияние криоконсервации на потомство крыс после WOCP&TP.

Методы: Крыс в возрасте 8–10 недель использовали в качестве доноров и реципиентов для аллотрансплантации. Пятнадцать целых яичников крыс разделили на три группы: группу оптимизированной перфузии, группу стандартной перфузии и группу свежего материала. Перед криоконсервацией и после размораживания применяли разные режимы перфузии. Целые яичники оценивали с помощью морфологического анализа, иммуногистохимического окрашивания и TUNEL-теста. Затем в течение 8 месяцев наблюдали функцию яичников и фертильность после WOCP&TP у 25 крыс с ПНЯ, индуцированной циклофосфамидом. Функцию яичников оценивали по вагинальным мазкам и уровню гормонов в крови. Восстановление фертильности количественно определяли по частоте живорождений после спаривания. Потомство крыс спаривали в возрасте 8–10 недель. У потомства оценивали наличие врожденных аномалий.

Результаты: Гистологическая оценка показала сохранную морфологию фолликулов во всех группах; в группе оптимизированной перфузии 77,6% общего числа фолликулов были интактными. Частота апоптоза клеток яичника в группе оптимизированной перфузии была значительно ниже, чем в группе стандартной перфузии. Из 20 живых крыс с ПНЯ у 14 (70%) через 2 недели после трансплантации началось восстановление функции яичников, а нормальные уровни гормонов были достигнуты через 4 недели после трансплантации. Четыре из 14 крыс забеременели и родили живое потомство. У одной крысы наступила вторая беременность и родился второй помет живых детенышей. После достижения потомством половой зрелости их спаривали, и родились крысы второго и третьего поколений. У всего потомства не было внешних аномалий.

Выводы: При криоконсервации и трансплантации целого яичника на модели ПНЯ у крыс, индуцированной циклофосфамидом, использование оптимизированной перфузии обеспечивало высокую частоту восстановления функции яичников и естественной фертильности с получением нескольких поколений потомства. Криоконсервация не влияла на жизнеспособность последующих поколений.