Различные уровни сывороточного эстрадиола не изменяют сроки ранней секреторной трансформации эндометрия

Вопрос исследования: Изменяют ли сверхфизиологические уровни эстрадиола (E2), соответствующие диапазонам, достигаемым при нормальном и выраженном ответе на суперовуляцию, начало секреторной трансформации эндометрия?

Краткий ответ: Выраженное превышение физиологических уровней E2 не влияет на способность физиологических концентраций прогестерона (P4) вызывать секреторную трансформацию эндометрия.

Что уже известно: Предыдущие исследования показали, что преждевременное повышение уровня P4 во время циклов ЭКО связано со снижением частоты наступления клинической беременности после переноса свежих эмбрионов вследствие смещения окна имплантации (WOI). Однако изменение сроков начала секреторной трансформации может наблюдаться не у всех пациенток. У пациенток с высоким ответом на стимуляцию, у которых сверхфизиологические уровни E2 сопровождаются аналогичным небольшим повышением P4, снижения частоты сохраняющейся имплантации не выявлено. В этом проспективном исследовании у каждой пациентки проводили полногеномный транскриптомный анализ и анализ метилирования эндометрия при различных концентрациях E2, что позволяет прояснить этот давно обсуждаемый вопрос.

Дизайн, размер и продолжительность исследования: Проведено рандомизированное проспективное исследование с парным дизайном, в которое включили 10 участниц. Их рандомизировали по порядку прохождения трех различных циклов стимуляции матки, каждый при определенной концентрации E2: физиологической (около 180 пг/мл), умеренно сверхфизиологической (600–800 пг/мл) или сверхфизиологической (2000 пг/мл). Целевые диапазоны E2 были выбраны таким образом, чтобы имитировать уровни, наблюдаемые в естественных циклах, при контролируемой стимуляции яичников и в циклах ЭКО. Валерат эстрадиола вводили для поддержания стабильного уровня E2 в течение 12 дней, после чего назначали внутримышечно масляный раствор P4 по 10 мг/сут в течение двух введений; затем выполняли биопсию эндометрия. В общей сложности 30 образцов эндометрия включили в полногеномный транскриптомный анализ и анализ метилирования.

Участницы, материалы, условия и методы: В исследование включили здоровых добровольцев без бесплодия в анамнезе; исследование проводили в одном крупном центре лечения бесплодия. Из образцов эндометрия выделяли ДНК и выполняли бисульфитное секвенирование для построения массива метилирования. Дифференциальный анализ метилирования проводили на основании различий значений M для каждой зондовой последовательности у одних и тех же участниц в разных группах лечения, а также с применением t-критерия. Для анализа РНК выделяли РНК и выполняли RNA-Seq; значения экспрессии генов сравнивали с помощью DESeq2. Все анализы проводили попарно: сначала сравнивали три цикла стимуляции у каждой участницы, затем — всех участниц каждой группы между собой.

Основные результаты и роль случайности: Средние пиковые уровни E2 и P4 составили соответственно 275 пг/мл и 4,17 нг/мл в физиологической группе, 910 пг/мл и 2,69 нг/мл в группе с умеренным повышением и 2043 пг/мл и 2,64 нг/мл в сверхфизиологической группе. Методом главных компонент проанализировали 834 913 CpG-сайтов на основании значений M у участниц в условиях низкого, умеренного и сверхфизиологического содержания E2 с использованием парного подхода. Различий в метилировании генома у одних и тех же участниц между группами E2 не выявлено. Парный анализ показал, что профили экспрессии генов у одной и той же участницы не различались при трех уровнях E2. При межгрупповом анализе также не выявлено значимых изменений экспрессии генов, связанных с физиологией эндометрия, между группами с низким, умеренным и сверхфизиологическим уровнем E2.

Ограничения и основания для осторожной интерпретации: Хотя каждая участница прошла физиологический цикл, в котором уровень E2 поддерживали в диапазоне, соответствующем естественному циклу, результаты ограничены отсутствием немедикаментозного контроля, который позволил бы оценить возможное влияние валерата эстрадиола. Кроме того, результаты получены у фертильных женщин, и реакция их эндометрия может отличаться от реакции эндометрия у пациенток с бесплодием. Несмотря на полногеномную оценку эндометрия и строгий парный дизайн исследования, размер выборки был небольшим.

Более широкие последствия результатов: Поскольку реакция эндометрия на P4 не зависит от уровня E2 даже в сверхфизиологическом диапазоне, снижение частоты имплантации в стимулированных циклах может быть обусловлено асинхронией между эмбрионом и эндометрием после преждевременного повышения P4 либо медленным формированием бластоцисты; эти факторы возникают независимо от степени повышения E2.

Финансирование исследования и конфликт интересов: Исследование финансировалось Foundation for Embryonic Competence, Баскинг-Ридж, штат Нью-Джерси, США. Доктор E.S. сообщает о консультативной работе для Foundation for Embryonic Competence, Баскинг-Ридж, штат Нью-Джерси, США. Остальные авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов, связанного с этой темой.

Регистрационный номер исследования: NCT02458404.