Характеристика наттокиназы Bacillus mojavensis LY-06, выделенного как новый устойчивый к желчным солям штамм

Наттокиназа — перспективный новый тромболитический препарат благодаря выраженному тромболитическому действию, высокой безопасности и низкой стоимости. Однако исследований пробиотических микроорганизмов, устойчивых к желчным солям и продуцирующих наттокиназу, не проводилось. В настоящем исследовании из местного доучи из Синьцзяна выделили штамм LY-06, устойчивый к желчным солям и продуцирующий наттокиназу. С помощью однофакторного и ортогонального экспериментов выход наттокиназы при ферментации довели до 1434,64 Ед/мл. Из генома штамма LY-06 клонировали ген aprY, отвечающий за фибринолиз, и добились его растворимой экспрессии в Escherichia coli в виде rAprY с His-меткой на C-конце; молекулярный докинг позволил объяснить причины нерастворимой экспрессии rAprY. Оптимальные значения pH и температуры для фибринолитической активности наттокиназы AprY, полученной при ферментации штаммом LY-06, составили 6,0 и 50 °C соответственно. В то же время для rAprY, экспрессированного в Escherichia coli, оптимальное значение pH составляло 8, а кислотоустойчивость, термостабильность и фибринолитическая активность были ниже, чем у AprY. Биоинформатический анализ показал, что His-метка на C-конце rAprY может влиять на его кислотоустойчивость, изменяя изоэлектрическую точку и поверхностный заряд фермента. По сравнению с AprY, изменения числа внутренних водородных связей и гибкости петлевой области структуры rAprY обусловили снижение фибринолитической активности и термостабильности.