Оптимизация осаждения белков с учётом эффективности их удаления и влияния на ионизацию при тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией

Четыре категории методов осаждения белков (с использованием органического растворителя, кислоты, соли и ионов металлов) исследовали в плазме методом спектрофотометрии, чтобы оценить эффективность удаления белка в зависимости от объёма, вида и серии плазмы. Ацетонитрил, трихлоруксусная кислота (ТХУ) и сульфат цинка продемонстрировали наилучшую эффективность удаления белка в своих категориях: при соотношении осадителя и плазмы 2:1 эффективность осаждения составила соответственно более 96, 92 и 91%. Для оценки влияния на ионизацию связанного с белками препарата, обусловленного эндогенными компонентами, сохраняющимися после применения различных осадителей белка, использовали систему постколоночной инфузии при тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Степень влияния на ионизацию варьировала в зависимости от подвижной фазы (от −20 до 93%) и осадителя белка (от 0,3 до 86%), но лишь незначительно зависела от вида плазмы (86–93%). Оптимальные биоаналитические методики удаления белков плазмы при минимальном влиянии на ионизацию исследуемой молекулы при тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией и турбоэлектрораспылением в режиме положительных ионов предусматривают осаждение трихлоруксусной кислотой в сочетании с подвижными фазами, состоящими только из органического растворителя (метанол:вода или ацетонитрил:вода), либо осаждение любым из исследованных осадителей, совместимых с масс-спектрометром, в сочетании с подвижной фазой метанол:0,1% водный раствор муравьиной кислоты.