Лютеолин уменьшает эпителиально-мезенхимальную трансформацию, вызванную окислительным повреждением, в клетках ARPE-19 посредством сигнальных путей Nrf2 и AKT/GSK-3β

Окислительный стресс играет ключевую роль в развитии возрастной макулярной дегенерации (ВМД), а эпителиально-мезенхимальный переход участвует в этом процессе. Целью настоящего исследования было изучение защитного действия лютеолина — природного флавоноида с выраженной антиоксидантной активностью — при индуцированном H2O2 эпителиально-мезенхимальном переходе в клетках ARPE-19. Для моделирования повреждения, связанного с окислительным стрессом, клетки ARPE-19 инкубировали с H2O2 в концентрации 200 мкМ. По данным анализа жизнеспособности клеток, лютеолин в концентрациях 20 и 40 мкМ значительно повышал выживаемость клеток ARPE-19, обработанных H2O2. Лютеолин также существенно защищал клетки ARPE-19 от индуцированного H2O2 апоптоза. В тесте на миграцию лютеолин значительно уменьшал миграцию клеток ARPE-19, вызванную H2O2. Эпителиально-мезенхимальный переход в клетках ARPE-19 оценивали методом вестерн-блоттинга и иммуннофлуоресцентного анализа. H2O2 значительно повышал экспрессию α-SMA и виментина и снижал экспрессию ZO-1 и E-кадгерина, тогда как предварительная обработка лютеолином приводила эти изменения к обратному развитию. Оценка влияния лютеолина на путь Nrf2 показала, что лютеолин способствовал транслокации Nrf2 в ядро и повышал экспрессию HO-1 и NQO-1. Кроме того, в клетках ARPE-19, обработанных H2O2, лютеолин значительно повышал активность SOD и GSH-PX и снижал внутриклеточные уровни активных форм кислорода и малонового диальдегида. Одновременно было установлено, что в клетках ARPE-19, обработанных H2O2, повышалась экспрессия TGF-β2, p-AKT и p-GSK-3β, тогда как при воздействии лютеолина она снижалась, что свидетельствует о подавлении лютеолином активации пути AKT/GSK-3β. Однако все эти эффекты лютеолина устранялись после трансфекции клеток ARPE-19 малой интерферирующей РНК к Nrf2. В совокупности полученные данные показали, что лютеолин подавляет эпителиально-мезенхимальный переход, индуцированный окислительным повреждением в клетках ARPE-19, посредством сигнальных путей Nrf2 и AKT/GSK-3β, что указывает на потенциальную возможность применения лютеолина для лечения сухой формы ВМД.