Биаллельные нарушения гена CYB5A при нарушениях формирования пола 46,XY: новый миссенс-вариант и глубокий интронный вариант

Введение: Цитохром b5, кодируемый геном CYB5A, — необходимый кофактор активности 17,20-лиазы CYP17A1. Дефицит CYB5A — редкая причина нарушений формирования пола (НФП) при кариотипе 46,XY. Мы сообщаем о двух пациентах из одной вьетнамской семьи с кариотипом 46,XY и женским фенотипом.

Методы: Проведены клиническое обследование и оценка гормонального профиля. Выполнено полногеномное секвенирование ДНК обоих пациентов; выявленные варианты классифицированы согласно рекомендациям ACMG/AMP 2015 года. Функциональное влияние интронного варианта CYB5A оценивали с помощью анализа сплайсинга РНК с использованием минигена в клетках HEK293T.

Результаты: У обоих пациентов выявлены низкие концентрации тестостерона и эстрадиола. При полногеномном секвенировании обнаружены новые сложные гетерозиготные варианты CYB5A: унаследованный от отца миссенс-вариант p.Val34Glu и унаследованная от матери делеция глубокого интронного участка c.129 + 862_129 + 863del, которая, согласно прогнозу SpliceAI, приводит к образованию криптических сайтов сплайсинга. Анализ с минигеном подтвердил активацию этих сайтов и включение псевдоэкзона между экзонами 1 и 2. Эта аномальная вставка приводит к появлению преждевременного стоп-кодона и, предположительно, к деградации транскрипта посредством механизма нонсенс-опосредованного распада. Оба варианта классифицированы как вероятно патогенные согласно рекомендациям ACMG/AMP.

Выводы: Два новых варианта CYB5A позволили установить генетический диагноз у обоих пациентов и расширили спектр патогенных вариантов, связанных с НФП вследствие изменений CYB5A. Результаты показывают, что глубокий интронный вариант может приводить к отсутствию белка из-за нарушения сплайсинга. Они также подчёркивают ценность полногеномного секвенирования и функциональных тестов для выявления и подтверждения клинически значимых некодирующих вариантов при НФП.