Криоконсервация яичника методом витрификации как альтернатива протоколам медленного охлаждения

Цель: изучить термические свойства криопротекторного раствора VS4 и целых овариальных комплексов овец с сосудистой ножкой, пропитанных VS4.

Дизайн: физическое и экспериментальное исследование на животных.

Условия: академическая исследовательская среда.

Животные: овцы в возрасте 5–6 месяцев.

Вмешательство: термические свойства раствора VS4 при охлаждении оценивали методом дифференциальной сканирующей калориметрии. VS4 содержит диметилсульфоксид 2,75 моль/л, формамид 2,76 моль/л и пропиленгликоль 1,97 моль/л. Целые яичники овец получали на бойне и подготавливали к витрификации. До и после витрификации проводили гистологическое исследование коркового слоя и сосудов, после чего изучали термические свойства коркового слоя яичника, пропитанного VS4.

Основные оцениваемые показатели: критическая скорость охлаждения (Vccr), температура стеклования (Tg), температура завершения плавления (Tm), оценка жизнеспособности фолликулов с помощью теста с трипановым синим и гистологическое исследование структуры яичника и сосудов.

Результаты: критическую скорость охлаждения (Vccr) раствора VS4 оценили как 14,3 ± 1,1 °C/мин. Температура стеклования составила -125,2 ± 0,2 °C, а температура завершения плавления — -34,3 ± 0,1 °C. После разработанного нами протокола витрификации непосредственная жизнеспособность фолликулов составила 61,4% ± 2,2%. Доля нормальных примордиальных фолликулов, сохранившихся после витрификации, составила 48% ± 3,8%. Vccr для коркового слоя, пропитанного VS4, определить не удалось из-за количества льда, образующегося уже при максимальной запрограммированной скорости охлаждения (-300 °C/мин). Средняя фактически достигнутая экспериментально скорость охлаждения коркового слоя яичника при витрификации составила -342,9 ± 49,6 °C/мин.

Выводы: витрификация целых органов, таких как яичники, представляет собой серьезную проблему в криобиологии и репродуктивной медицине. Для продвижения в этой области необходимы физические исследования. Следовательно, требуется усовершенствовать протокол перфузии яичника, чтобы улучшить пропитывание коркового слоя яичника и снизить Vccr как в ткани, так и в растворе VS4.