Жизнеспособность ткани яичника после криоконсервации целого овечьего яичника: оценка влияния включения сфингозин-1-фосфата

Введение: Предполагается, что криоконсервация вызывает апоптоз, способствуя повреждению стромы и потере фолликулов в ткани яичника. В настоящем исследовании оценивали жизнеспособность ткани после криоконсервации целого овечьего яичника и влияние антиапоптотического агента сфингозин-1-фосфата (S-1-P) на эффективность криоконсервации яичника.

Методы: Целые овечьи яичники подвергали криоперфузии и криоконсервации по протоколу медленной заморозки с быстрым оттаиванием, после чего выполняли ряд функциональных тестов жизнеспособности. Затем оценивали эффект добавления 20 мкмоль/л S-1-P в криозащитную среду в сравнении с контрольной криозащитной средой и некриоконсервированной тканью.

Результаты: Жизнеспособность клеток гранулезы, оцененная по окраске трипановым синим, существенно не изменялась, однако экспрессия Ki67, отражающая клеточную пролиферацию, снижалась после криоконсервации (P<0,05). После добавления S-1-P жизнеспособность клеток гранулезы не страдала ни от криоконсервации, ни от включения S-1-P. Захват бромдезоксиуридина, указывающий на синтез ДНК, наблюдался как в криоконсервированной, так и в свежей кортикальной ткани, а окраска на 5(6)-карбоксифлуоресцеиндиацетат сукцинимидиловый эфир показала наличие многих жизнеспособных мелких фолликулов. Криоконсервация усиливала повреждение артериального эндотелия (P<0,01), но не вызывала разрыв внутренней эластической мембраны и не приводила к повреждению вен. Однако добавление S-1-P не улучшало выживаемость ткани яичника или сосудистой ткани.

Выводы: Полученные результаты обнадеживают в отношении криоконсервации целого яичника, демонстрируя сохранение жизнеспособности клеток, однако не подтверждают целесообразность включения S-1-P в этой концентрации для улучшения жизнеспособности ткани после криоконсервации.