Сочетание Alisma и Atractylodes влияет на биологическое поведение гладкомышечных клеток сосудов посредством подавления miR-128-5p и регуляции гена p21

Цель: Считается, что сочетание Alisma и Atractylodes (AA) оказывает антиатеросклеротическое действие, однако механизм этого эффекта остаётся неясным. Целью настоящего исследования было определить роль AA в изменении поведения гладкомышечных клеток сосудов (ГМКС), индуцированном окисленными липопротеинами низкой плотности (ox-LDL), и изучить влияние микроРНК (miRNA).

Методы: Для оценки миграции ГМКС использовали метод заживления царапины; фенотипическую трансформацию оценивали с помощью иммунноцитохимического окрашивания и вестерн-блоттинга на SM22α. Пролиферацию ГМКС определяли методом иммунноцитохимического окрашивания на 5-бром-2′-дезоксиуридин (BrdU) и с помощью проточной цитометрии. Профилирование miRNA методом микроматричного анализа проводили с использованием секвенирования малых РНК Lianchuan Biological. ГМКС трансфицировали миметиком и ингибитором miR-128-5p, после чего изучали миграцию, фенотипическую модуляцию и пролиферацию клеток. Связывающий участок miR-128-5p в 3′-нетранслируемой области гена p21 предсказывали in silico и оценивали с помощью люциферазного анализа.

Результаты: AA и блокатор внеклеточно регулируемой протеинкиназы 1/2 (ERK1/2) U0126 значительно подавляли миграцию, повышали экспрессию SM22, снижали пролиферацию ГМКС, индуцированных ox-LDL, повышали экспрессию miR-466f-3p и miR-425-3p и подавляли экспрессию miR-27a-5p и miR-128-5p. miR-128-5p регулирует гены тканевых ингибиторов металлопротеиназ (TIMP), регулятора молчания информации 2 (SIRT2), рецептора, активируемого пролифератором пероксисом (PPAR), и p21, связанные с поведением ГМКС. Миметик miR-128-5p усиливал миграцию и пролиферацию ГМКС и подавлял экспрессию p21, p27 и SM22α. Ингибитор miR-128-5p повышал экспрессию p21, p27 и SM22α и подавлял миграцию, фенотипическую трансформацию и пролиферацию ГМКС. miR-128-5p непосредственно связывалась с участком 3′-нетранслируемой области гена p21, отрицательно регулировала экспрессию p21 и поддерживала пролиферацию ГМКС.

Выводы: Сочетание Alisma и Atractylodes подавляло миграцию, фенотипическую трансформацию и пролиферацию ГМКС, индуцированных ox-LDL, за счёт подавления miR-128-5p, регулирующей ген p21. Это может представлять эффективный подход к лечению атеросклероза.