Пролиферативная фаза эндометрия при ЭКО/ИКСИ: внутрициклевый молекулярный анализ, предсказывающий исход после переноса свежего эмбриона

Вопрос исследования: Позволяет ли ранняя биопсия эндометрия в пролиферативную фазу, полученная во время стимуляции яичников, получить сведения, предсказывающие исход после переноса свежего эмбриона (ПЭ) в том же цикле?

Ответ: Транскриптомный анализ цельной ткани эндометрия не выявил значимых различий в экспрессии генов, связанных с исходом; однако профиль секретома изолированных, культивированных и in vitro децидуализированных стромальных клеток эндометрия (СКЭ) значимо различался у пациенток, у которых наступили живорождение, и у пациенток с неудачей имплантации после свежего ПЭ в том же цикле, когда была выполнена биопсия.

Что уже известно: В большинстве протоколов исследований рецептивности эндометрия биопсию берут в окно имплантации (ОИ). Однако это исключает перенос эмбриона в том же цикле, хотя эндометрий, как показано, со временем адаптируется. Сообщалось, что биопсии эндометрия, взятые во время стимуляции яичников, не ухудшают вероятность имплантации, и в таких биоптатах у женщин, достигших беременности, по сравнению с теми, у кого беременности не было, выявлялись различия в экспрессии генов. Влияние пролиферативной фазы эндометрия на имплантацию эмбриона человека остается неясным, но заслуживает дальнейшего изучения, тем более что в биоптатах эндометрия лютеиновой фазы транскрипционный профиль, предсказывающий повторную неудачу имплантации, ассоциировался со сниженной пролиферацией клеток, что может указывать на участие пролиферативной фазы. Изоляция, культивирование и in vitro децидуализация (IVD) СКЭ — часто применяемый базовый исследовательский метод для оценки функции эндометрия, а нарушение секретома СКЭ ранее связывали с неудачной имплантацией.

Дизайн, объем и длительность исследования: Исследование было встроено в рандомизированное контролируемое исследование (РКИ), изучавшее влияние скретчинга эндометрия в раннюю фолликулярную фазу стимуляции яичников на частоту клинической беременности после ЭКО/ИКСИ. Из 96 доступных биоптатов эндометрия после исключения образцов без свежего ПЭ и после тщательного сопоставления, чтобы минимизировать риск смешения факторов, для анализа было оставлено 18 образцов для двух клинических групп: девять биоптатов у пациенток с живорождением и девять биоптатов у пациенток с неудачей имплантации; в обоих случаях речь шла о свежем ПЭ, выполненном в том же цикле, что и биопсия. Мы изучали пролиферативный эндометрий путем анализа его транскриптома и путем изоляции, культивирования и ин vitro децидуализации СКЭ. Этот последний метод был впервые применен к биоптатам пролиферативного эндометрия, полученным во время стимуляции яичников, для прогнозирования исхода в том же цикле, чтобы преодолеть межцикловую вариабельность.

Пациенты/материалы, условия, методы: Для 18 индивидуальных биоптатов цельной ткани эндометрия было выполнено секвенирование РНК на платформе Illumina HiSeq1500. Анализ дифференциальной экспрессии генов проводили тремя способами (DESeq2, EdgeR и критерий суммы рангов Уилкоксона, все в R). Изоляцию СКЭ и IVD выполняли для подгруппы из девяти образцов в течение 2 и 4 дней; затем среду из недифференцированных и децидуализированных культур собирали, хранили при -80 °C и впоследствии исследовали на 45 цитокинов с помощью мультиплексного суспензионного bead-иммуноанализа. Анализ выполняли с помощью моделирования методом частичных наименьших квадратов.

Основные результаты и роль случайности: После поправки на множественные проверки гипотез анализ дифференциальной экспрессии не выявил значимых различий между образцами эндометрия у пациенток с живорождением и у пациенток с неудачей имплантации после свежего ПЭ. Однако анализ секретома после изоляции и культивирования СКЭ показал два отчетливых кластера, которые четко соответствовали двум клиническим группам. После IVD профиль секретома смещался от профиля недифференцированных клеток, но различие между двумя клиническими группами сохранялось, хотя и становилось менее выраженным, что указывает на сближение цитокиновых профилей после децидуализации.

Ограничения, причины для осторожности: Интерпретировать результаты следует с осторожностью из-за небольшого размера выборки и ин витро характера эксперимента на СКЭ. Необходима валидация на большей выборке, однако ее сложно выполнить из-за крайне ограниченной доступности биоптатов пролиферативного эндометрия в цикле вне условий РКИ.

Более широкое значение результатов: Эти данные поддерживают гипотезу о том, что эндометрий следует оценивать не только в окно имплантации, и что некоторые нарушения функции эндометрия, вероятно, можно выявлять уже в ранней фазе цикла, используя пролиферативную фазу. Это открывает новые возможности для разработки тестов эндометрия — как диагностических, так и прогностических в отношении исхода лечения ЭКО/ИКСИ.

Финансирование/конфликт интересов: Исследование поддержано Fonds Wetenschappelijk Onderzoek (FWO, Фландрия, Бельгия, 11M9415N, 1 524 417N), Wetenschappelijk Fonds Willy Gepts (WFWG G160, Университетская клиника Брюсселя, Бельгия) и National Medicine Research Council (NMRC/CG/M003/2017, Сингапур). Конфликтов интересов нет.

Номер регистрации исследования: NCT02061228.