Комплексная валидация метода LC-MS/MS для количественного определения 37 фитохимических соединений-маркеров в видах рода Achillea: подробное исследование A. coarctata и A. monocephala

Цель настоящего исследования — оптимизация и валидация комплексного метода LC-MS/MS для количественного определения 37 фитохимических соединений, включая 15 фенольных кислот, 17 флавоноидов, 3 нефенольные органические кислоты, 1 фенольный альдегид и 1 бензопирен, в видах рода Achillea. Хотя в качестве реальных образцов были выбраны виды рода Achillea, разработанный метод применим к широкому спектру растений. Метод прошёл полную валидацию по линейности, точности (степени извлечения), внутри- и межсерийной прецизионности (повторяемости), пределам обнаружения и количественного определения (LOD/LOQ), а также относительной стандартной неопределённости (U% при доверительной вероятности 95%; k = 2). Обратно-фазовую сверхвысокоэффективную жидкостную хроматографию оптимизировали для достижения оптимального разделения 37 фитохимических соединений и устранения эффектов подавления ионизации. Для масс-спектрометрического детектирования использовали тройной квадрупольный масс-спектрометр; для каждого аналита оптимизировали режимы положительной или отрицательной ионизации. Для количественного определения аналитов применяли мониторинг множественных реакций (MRM), оптимизируя соответствующие молекулярные ионы и ионы-переходы. Фитохимический состав этанольных и метанол-хлороформных экстрактов корней и надземных частей A. coarctata и A. monocephala исследовали с помощью разработанного и валидированного метода LC-MS/MS. В корнях и надземных частях обоих видов выявлено значительное содержание отдельных фенольных и нефенольных кислот (хинной, яблочной, фумаровой, хлорогеновой и ванилиновой кислот), а также флавоноидов (рутина, гесперидина, изокверцитрина, апигетрина, лютеолина и апигенина). Кроме того, изучены общее содержание фенольных соединений и флавоноидов, антиоксидантная активность (с помощью теста на удаление свободных радикалов DPPH, теста на обесцвечивание радикал-катиона ABTS, тест-системы перекисного окисления липидов с β-каротином и метода восстановления меди CUPRAC), антихолинэстеразная активность, ингибирование тирозиназы и уреазы, а также цитотоксическая активность в отношении клеточной линии HeLa (карцинома шейки матки человека) у A. coarctata и A. monocephala. Установлено, что исследованные виды Achillea, богатые фенольными соединениями, флавоноидами и хлорогеновой кислотой, одновременно обладают высоким антиоксидантным и цитотоксическим потенциалом. Согласно результатам исследований методом LC-MS/MS, а также исследований антиоксидантной и цитотоксической активности, после подробного изучения химического состава и токсичности A. coarctata и A. monocephala могут рассматриваться в будущем как перспективные источники природных веществ для разработки нутрицевтиков или функциональных пищевых ингредиентов.